题干
研究人员利用基因工程和动物细胞工程技术对某品种奶牛进行改良，以使奶牛的乳腺表达并分泌蛋白B，技术路线如图所示。回答下列问题。 （1）在获取目的基因的过程中，步骤①和步骤②所用的酶分别是___________。 （2）完成基因导入后，需要鉴定牛胚胎成纤维细胞染色体DNA上是否成功插入B基因，可使用的检测技术有___________(答出1点即可)等。 （3）牛卵母细胞去核时，所使用的卵母细胞应处于_______(填“减数分裂Ⅰ中期”“减数分裂Ⅱ中期”或“有丝分裂中期”)。 （4）步骤③将2种细胞融合常用的方法有_______(答出1点即可)等。步骤④胚胎移植前，需要对重构胚进行_________________处理，以使重构胚完成细胞分裂和发育进程。 （5）设计实验，鉴定成年转基因母牛的乳腺是否分泌了蛋白B，简要写出实验思路。
答案
（1）逆转录酶、DNA聚 （3）减数分裂Ⅱ中期 （4） ①. 电融合法 ②. 激活 （5）取母牛的乳汁，进行抗原-抗体杂交实验
解析
步骤①是以mRNA为模板合成互补DNA的逆转录过程，需要逆转录酶；步骤②是通过PCR技术扩增目的基因，需要用到耐高温的DNA聚合酶。 检测细胞染色体DNA上是否插入目的基因，属于分子水平的核酸检测，可通过特异性PCR技术扩增出目的基因片段来验证插入是否成功，也可以用DNA分子杂交技术。 动物体细胞核移植的去核操作，需要选用发育到减数分裂Ⅱ中期的卵母细胞，该时期的卵母细胞细胞质具备促进细胞核全能性表达的条件。 动物细胞融合的常用方法有电融合法、聚乙二醇（PEG）融合法、灭活病毒诱导法；重构胚需要通过激活处理（如电刺激、化学刺激），才能启动细胞分裂，完成后续的发育进程。 检测目的基因是否成功表达出蛋白质，采用抗原-抗体特异性结合的原理，可取母牛的乳汁，进行抗原-抗体杂交实验，即可鉴定乳腺是否分泌了蛋白B。