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2026 北京 · 第20题

2026 北京选必3-第3章 基因工程基因表达载体构建●●●○○

题干

学习以下材料,回答(1)~(4)题。 合成生物学助力尿酸代谢平衡 尿酸是细胞中嘌呤分解代谢的产物。大多数哺乳动物可以依靠细胞内的酶分解尿酸,但人类缺少酶,导致血液中的尿酸浓度比大多数哺乳动物高几十倍。尿酸有多种生物学功能,如可以作为还原剂减少细胞中的自由基。若尿酸代谢异常,浓度超过时,尿酸可能沉积于关节囊中,引发痛风。 为探索痛风的新疗法,研究者利用合成生物学的方法建立了一个尿酸响应体系。他们首先构建了两种表达载体(见下图),右侧是报告基因SEAP表达载体,启动子和SEAP之间插入了cH序列;左侧是表达载体,是来自细菌的一种蛋白,既能与尿酸可逆结合,也能与可逆结合。当尿酸浓度较低时,与结合的多,从而减少SEAP的转录;当尿酸浓度较高时,更多的与尿酸结合,导致结合于的减少,SEAP的转录增加(如下图)。将两种载体同时导入体外培养的细胞,发现SEAP的表达随培养液中尿酸浓度的变化而变化;在相同尿酸浓度下,SEAP的表达量随插入cH数目的增加而减少。 随后,研究者将酶基因改造为基因,用基因替换图中的SEAP,构建sU表达载体,其中串联的cH数目为8个。将R表达载体和sU表达载体导入细胞,再将细胞植入U酶缺失的小鼠体内,7天后小鼠血液中尿酸水平由降为,与饲喂痛风常用药的效果相似。可见上述研究为痛风的治疗提供了新思路。 (1)表达载体中__________的功能是驱动目的基因的转录。 (2)由文中信息可知尿酸与序列之间的关系:二者__________结合蛋白。 (3)为降解血液中而不是细胞内的尿酸,研究者将U酶基因改造为基因,基因应编码__________的U酶。 (4)对文中的表达载体稍加改造,可进一步降低U酶缺失小鼠的血液尿酸浓度。为此,利用文中现有的DNA序列,可以在sU表达载体中进行的改造是__________。 (5)利用合成生物学构建类似的稳态调控系统,也有希望用于其他代谢相关疾病的治疗。如果采用文中设计思路助力血糖稳态的维持,关键是寻找__________。

答案

(1)启动子 (4)减少串联的cH数日 (5)一种能与葡萄糖特异性结合的蛋白(类似R蛋白的功能)

解析

启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点,功能就是驱动下游目的基因的转录,表达载体中启动子的功能是驱动目的基因的转录。 R蛋白既可以和尿酸可逆结合,也可以和cH序列可逆结合,尿酸浓度低时R更多结合cH,尿酸浓度高时R更多结合尿酸、从cH上脱离,说明尿酸和cH序列会竞争结合R蛋白。 实验目的是降解血液中的尿酸而非细胞内的尿酸,因此改造后的sU基因编码的U酶需要被分泌到细胞外,才能进入血液发挥降解尿酸的作用。 “相同尿酸浓度下,SEAP的表达量随插入cH数目的增加而减少”,现在要进一步降低小鼠血液尿酸浓度,就需要让sU(U酶)的表达量更高,因此可以减少sU表达载体上串联的cH序列的数量,降低R蛋白对sU转录的抑制作用,提升U酶的合成量,增强尿酸降解效果。 该尿酸调控系统的核心是“能响应目标代谢物(尿酸)、同时可结合对应调控DNA序列的双功能R蛋白+R蛋白的结合靶序列cH”,要复助力血糖稳态的维持,关键是寻找一种能与葡萄糖特异性结合的蛋白(类似R蛋白的功能)。